5.1總則

5.1.1清潔所有必需的玻璃器皿，并按照SOP進(jìn)行去熱原，以便對(duì)玻璃器皿進(jìn)行去熱原。
5.1.2將所有無熱原玻璃器皿轉(zhuǎn)移到BET室。
5.1.3開關(guān)“ON”加熱塊按照操作用于指令的SOP 加熱塊，并在37設(shè)定的溫度°C
5.1.4 MVD計(jì)算為下述式樣品試樣-
5.1.5用LRW將待測(cè)樣品稀釋至四分之一MVD，并在渦旋振蕩器上振蕩3分鐘。
5.1.6注射用水的取樣和測(cè)試：按照取樣計(jì)劃，將注射用水樣品收集在去熱原的小瓶或試管中。注射用水應(yīng)  根據(jù)分析方法進(jìn)行測(cè)試。

5.2制定控制標(biāo)準(zhǔn)（CSE）

5.2.1按照制造商提供的瓶子和制造商提供的說明中的說明重新配制LRW中的CSE，并間歇渦旋30分鐘。
5.2.2重構(gòu)后4周內(nèi)使用重構(gòu)后的CSE。
5.2.3用LRW制備CSE稀釋液以產(chǎn)生1EU / ml，并在渦旋中搖動(dòng)稀釋液3分鐘。
5.2.4通過稀釋體積制備4λ，相當(dāng)于從1 EU / ml到LRW的4λ濃度。將稀釋液在漩渦中搖動(dòng)3分鐘。（4λ由l濃度反算，即λ是裂解物的靈敏度）。

5.3裂解液的重建

5.3.1現(xiàn)在，在無菌刀片的幫助下，通過打開裂解液的鋁質(zhì)封口來重新配制裂解液。
5.3.2通過在堅(jiān)硬的表面上敲擊，將裂解物粉末收集到樣品瓶的底部。然后慢慢打開軟木塞。
5.3.3按照制造商的說明，在使用前添加LRW或緩沖溶液，并立即更換軟木塞。

5.4標(biāo)記的裂解液敏感性的確認(rèn)

5.4.1重復(fù)四次確認(rèn)，然后在測(cè)試中使用裂解物溶液的標(biāo)記靈敏度λ，以EU / ml或IU / ml表示。當(dāng)使用新一批的裂解物或?qū)嶒?yàn)條件發(fā)生任何變化而可能影響測(cè)試結(jié)果時(shí)，必須進(jìn)行裂解物敏感性的確認(rèn)。
5.4.2通過將一系列CSE溶液用水稀釋成BET（LRW），用至少四種等于2λ，λ0.5λ和0.25λ的濃度的4λ溶液制備CSE稀釋液。
5.4.3取10個(gè)去熱原化驗(yàn)管，并通過編號(hào)對(duì)管進(jìn)行標(biāo)記并將其一式四份排列在架子上，然后按照下表進(jìn)行操作-?
5.4.4分別將100 ml稀釋的CSE（即分別為2λ，λ，0.5λ和0.25λ）移入去熱原的試管（10 mm x 75 mm）中，并進(jìn)行相應(yīng)標(biāo)記。對(duì)于NWC（負(fù)水控制），請(qǐng)分別使用100 ml LRW，并一式四份進(jìn)行測(cè)試。
5.4.5在每個(gè)試管中加入100毫升重構(gòu)的裂解液，并輕輕混合。
5.4.6將反應(yīng)混合物在37°±1°下恒溫孵育60±2分鐘，避免振動(dòng)。
5.4.7孵育后，取每個(gè)試管，直接從培養(yǎng)箱中轉(zhuǎn)過來，以一個(gè)平穩(wěn)的動(dòng)作將其翻轉(zhuǎn)大約180°。如果形成了牢固的凝膠，該凝膠在反演后仍保留在原位，則記錄結(jié)果為陽(yáng)性。如果未形成完整的凝膠，則結(jié)果為陰性。
5.4.8除非zui低濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液在所有重復(fù)測(cè)試中均顯示陰性結(jié)果，否則該測(cè)試無效。
5.4.9終點(diǎn)是內(nèi)毒素濃度下降系列中的zui后一個(gè)陽(yáng)性結(jié)果。使用以下表達(dá)式計(jì)算終點(diǎn)濃度的對(duì)數(shù)平均值，然后計(jì)算平均值的對(duì)數(shù)：
5.4.10幾何平均終點(diǎn)濃度是裂解物溶液的測(cè)量靈敏度（EU / ml或IU / ml）。如果其不小于0.5λ且不大于2λ，則確認(rèn)標(biāo)記的靈敏度并將其用于用該裂解物進(jìn)行的測(cè)試中。

5.5測(cè)試程序

5.5.1如表1，
表– 1 所示制備溶液A，B，C和D
5.5.2取8根去熱原的化驗(yàn)管并編號(hào)，并在對(duì)置的架子上進(jìn)行標(biāo)記。例如，NPC為1＆2，PPC為3＆4，PWC為5＆6，負(fù)水控制為7＆8。
5.5.3在NPC和PWC中加入50毫升LRW，在NWC中加入100毫升。立即添加50 ml產(chǎn)品樣品，將其在NPC和PPC中以MVD / 4稀釋，然后添加50ml CSE，將其在PPC和PWC中稀釋至4λ。
5.5.4zui后在所有試管中加入100 ml裂解液，然后用手混合測(cè)定管并在加熱塊中孵育，在加熱塊中將溫度保持在37±1°C保持60±2分鐘。

5.6結(jié)果解釋

5.6.1凝膠凝塊法中的每個(gè)試管均被解釋為陽(yáng)性或陰性，陽(yáng)性試驗(yàn)表明形成牢固的凝膠，當(dāng)試管倒置180°時(shí)能夠保持其完整性。
5.6.2陰性測(cè)試的特征是不存在凝膠或形成粘性物質(zhì)，當(dāng)試管在180°倒置時(shí)粘性物質(zhì)不起作用。
5.6.3除非兩個(gè)陽(yáng)性對(duì)照溶液B和C的兩個(gè)重復(fù)均為陽(yáng)性，而陰性對(duì)照溶液D的兩個(gè)重復(fù)均為陰性，否則該測(cè)試無效。
5.6.4當(dāng)溶液A的兩個(gè)重復(fù)均發(fā)現(xiàn)陰性結(jié)果時(shí)，所檢查的制劑符合測(cè)試要求
。5.6.5溶液A的兩個(gè)重復(fù)均發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，則不符合測(cè)試要求。
5.6.6如果溶液A的一個(gè)重復(fù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，而另一溶液的陰性結(jié)果重復(fù)試驗(yàn)。如果在重復(fù)測(cè)試中溶液A的兩次重復(fù)均發(fā)現(xiàn)陰性結(jié)果，則所檢查的制劑符合測(cè)試要求。

5.7故障調(diào)查

5.7.1當(dāng)在兩個(gè)測(cè)試準(zhǔn)備試管上都觀察到陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，通過檢查以下參數(shù)來調(diào)查其失敗的原因。
5.7.2檢查產(chǎn)品稀釋度，CSE稀釋度和裂解物稀釋度。
5.7.3是否按照SOP對(duì)玻璃器皿進(jìn)行了清潔和去熱原處理。
5.7.4檢查裂解液批次和匹配的CSE的敏感性報(bào)告。
5.7.5檢查加熱塊溫度和校準(zhǔn)。
5.7.6檢查微量移液器校準(zhǔn)。
5.7.7檢查是否有微生物學(xué)家污染。

5.8注意事項(xiàng)

5.8.1復(fù)水的CSE可以在2至8°C下保存28天。
5.8.2提供的COA專門用于裂解液批次和CSE批次。因此，使用相同的批次進(jìn)行測(cè)試
5.8.3請(qǐng)勿渦旋裂解液。

5.9頻率

5.9.1裂解物敏感性的確認(rèn)–每批貨物。
5.9.2按照注射用水抽樣計(jì)劃。
5.9.3成品和原材料按批次進(jìn)行。

6.0縮寫

SOP：標(biāo)準(zhǔn)操作程序
QA：質(zhì)量保證
QC：質(zhì)量控制
NA：不適用
BET：細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)試
CSE：對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素
MVD：zui大有效稀釋液
LRW：Lal試劑水
PPC：陽(yáng)性產(chǎn)品對(duì)照
NPC：陰性產(chǎn)品對(duì)照
PWC：陽(yáng)性水控制
NWC：負(fù)水控制